الإختبارات الفسیولوجیة لتعریف الخمائرPhysiological tests for yeasts identificationمازالت الخواص الفسیولوجیة ھامة في تعریف سلالات الخمیرة وفیما یلي نتناولالإختبارات الفسیولوجیة لتعریف الخمائر:یمكن ملاحظة الإستفادة من السكریات تحت الظروف غیر الھوائیة بصفة عامى عنطریق تقدیر كمیة غاز ثاني أكسید الكربون المتكونة والتي یتم تجمیعھا في أنابیب وقد ثار جدل بین العلماء حول أھمیة ھذة الإختبارات حیث اعتبر البعض أنھاغیر دقیقة بالنسبة للخمائر المعروفة بأن لھا نشاط تخمیري بطیئ وذلك لأن كمیة ثانيأكسید الكربون الناتجة بواسطة ھذة الخمائر لا تتكون بسرعة بسبب ذلك اعتبرت بعضالخمائر أن لیس لھا نشاط تخمیري وظل ھذا الإعتقاد سائد بالنسبة لبعض أنواع الخمائرومع ذلك مازالت تتبع طریقة تجمیع غاز ثاني أكسید الكربون في أنابیبدورھام في تعریف الخمائر وذلك بسبب سھولة القیام بھا.التخمري للخمیرة بإستخدام سكر الجلوكوز. فإذا لم یلاحظ حدوث تخمر لسكر الجلوكوزفلا یكون ھناك حاجة لإجراء مزید من التخمر علي السكریات الأخري لأن الخمیرة التيلا تستطیع أن تخمر سكر الجلوكوز لن تستطیع تخمر باقي السكریات.المستخدمة في تعریف الخمائر ھي (الجلوكوز، التریھالوز والزیلوز).یتم اختبار السكریات عند تركیز 2) %وزن/حجم) (أو4 %بالنسبة لسكر الرافینوز) فيالبیئة الأساسیة التي یتحتوي علي 2) %وزن/حجم) مستخلص خمیرة و 5.وذلك في أنابیب اختبار تحتوي كل أنبوبة علي 3 إلي 5.أنبوبة صغیرة في وضع مقلوب لتتجمع بھا فقاعات غاز ثاني أكسید الكربون المتكونة.ً إلي البیئة المعقمة والمحتویة أیضایضاف السكر الذي تم تعقیمة منفصلاالبرومیثایمول blue Bromthymol وھو دلیل یبین التغیر في رقم ال pH .الأنابیب بلقاح مكثف من المزرعة المراد اختبارھا، ویجب أن یكون اللقاح من مزرعة تحضن الأنبیب علي درجة حرارة من 25 إلي 28م الأنواع المحبة للحرارة المنخفضة تحتاج إلي تحضین عليo درجة حرارة 12 إلي 17مCarbon assimilation test :الكربون تمثیل إختبار- 2تمثیل مركبات الكربون یمكن أن یختبر بطریقة النمو في بیئة النمو في أنابیب تحتويعلي بیئة سائلة وھي طریقة حساسة وتستعمل في التعریف. وفي ھذة الطریقة یتم اختبارقدرة الخمائر علي النمو في بیئات تحتوي علي أي من السكریات الأتیة:1 -الھكسوزات أوالسكریات السداسیة (الجلوكوز،2 -النتوزات أو السكریات الخماسیة (الزیلوز،5 -السكریات المتعددة (النشا الذائب،6 -الكحولات (الإریثیرتول Erythritol ،7 -الأحماض العضویة (السكسینیك،8 -الجلیكوسیدات (ألفا-میثیل-د-جلوكوسید glucoside-D-methyl-α ،تتلخص الخطوات العملیة لإختبار تمثیل الكربون فیما یلي:- یضاف مصدر الكربون المراد اختبار قدرة الخمیرة علي تمثیلھ إلي بیئة نمو الخمیرة5 %ماعدا سكر الرافینوز الذي یضاف بنسبة 1.- یتم ضبط رقم ال pH بعد ذلك لیكون 6.5 ذلك بالنسبة لمصادر الكربون التي یكونمصدرھا غیر طبیعي مثل الأحماض العضویة.- تعبأ أنابیب اختبار بالماء المقطر بحیث تحتوي كل أنبوبة علي 5.0 مل من محلول السكرالمراد اختبار قدرة الخلایا علي تمثیلة.- تلقح الأنابیب بمعلق الخمائر المراد اختبارھا ثم یقاس النموعن طریق قیاس العكارة o وذلك بعد التحضین علي درجة حرارة 25م- سوف یكون النمو أسرع إذا تم رج الأنابیب لمدة نصف ساعة.الخمائرالمتوقع أنھا تحب الحرارة المنخفضة أو التي ثبت في أي اختبار احتمالي أنھاo محبة للحرارة المنخفضة علي 12 إلي 17مNitrogen assimilation tests :النیتروجین تمثیل إختبارات- 3تستخدم المركبات النیتروجینیة التي تشمل النترات، الإیثیل أمین Ethylamine ،ل-والكادافرینن Cadaverine ،بشكل روتیني في تعریف الخمائر،وذلك علي نفس الأساس المتبع في اختبارات تمثیل الكربون.ومن ناحیة أخري،و and Kurtzmanl,Fel سنة 1998م خطوات بسیطة لمعرفة الوضع التقسیمي للخمیرة تعتمد علي قدرةالمیكروبات علي تمثیل 43 نوع من المواد العضویة كمصدر وحید للكربون ومقدرتھاعلي تمثیل 9 مواد نیتروجینیة كمصدر وحید للنیتروجین. فبالنسبة لإختبار النمو علي0 %خلیة/مل. ویقدر تمثیل ھذة المواد -5 بدون أحماض أمینیة بحیث یكون حجم اللقاح 10x2ً مي الخمائر أن تنأما بالنسبة لإختبار قدرتھا علي تمثیل المواد النیتروجینیة فیجب أولابغرض تجویعھا للنیتروجین. بعد ذلك تلقح الخمائر الجائعة للنیتروجین في أنابیب إختبار1 %من بیئة YCB.29 للتعرف Diazonium Blue B (DBB) color test الدایزونیم إختبارأزرق یجريعلي الخمائر الأسكیة والخمائر البازیدیة.خلال تكون مركبات الأمیلوید Amyloid وھي عبارة عن سكریات مختلفة تتكون0 %و 1.0 %سیكلوھیكسامید Cycloheximide ،وحامض الخلیك كما یلاحظ الشكل المورفولوجيللخلایا ولونھا وتكون الخیوط.تستخدم اختبارات حاجة الخمیرة إلي الفیتامینات في عملیة التعري. وتجري ھذةمن الفیتامینات فإذا حدث نمو تلقح أنبوبة ثانیة من الأولي للحكم علي مدي احتفاظ ھذةالسلالة بخاصیة عدم الحاجة إلي الفیتامینات،الفیتامینات المختلفة ویتم الحكم علي حاجة الخمائر إلي الفیتامینات من خلال ملاحظةالنمو بعد إضافة كل فیتامین.یوجد عدد أخر من الإختبارات الفسیولوجیة التي قد تسھل عملیة تعریف سلالاتالخمیرة. ھذة الإختبارات تشمل الأتي: Aیجري ھذا الإختبار في بیئة خمیرة تحتوي علي نیتروجین حیث یضاف 5.محلول السیكلوھیكسامید 1.0 %أو 1 %والذي تم تعقیمة عن طریق الترشیح إلي 5.4 ملمن محلول الجلوكوز 5.السیكلوھیكسامید قیمتة 100 جزء في الملیون أو 100 جزء في الملیون علي التوالي.30Growth on 50% glucose :جلوكوز% 50 في النمو.بیئة آجار- مستخلص الخمیرة المحتویة علي 50 %جلوكوز.أسبوع من التحضین.Production of Acetiv acid :الخلیك حامض إنتاج.بیئة آجار-جلوكوز-ببتون-مستتخلص الخمیرة والمضاف لھا 5.0) %وزن/حجم) ویلاحظ إنتاج حامض الخلیك من خلال تكون منطقة رائقة حولالمزرعة النامیة بعد التحضین.في أنابیب (5.0مل) وتخزن الأنابیب فيأو علي درجة الحرارة o الفریزر. بعد التلقیح تحضن الأنابیب علي درجة حرارة 37م یدل تغیر اللون إلي o القصوي بالنسبة للسلالات التي لھا درجة نمو قصوي أقل من 37مE .تفاعل ملح ب دیازونیم الأزرق: reaction B blue Diazoniumیذاب قبل الإستعمال مباشرة ملح ب دیازونیم الأزرق 1.0) %وزن/حجم) في 1.حامض الھیدروكلوریك المثلج.مستخلص الخمیرة بالسلالة المراد اختبارھا وتحضن لمدة تتراوح بین عشرة أیام وثلاثةأسابیع. تضاف قطرات من النلح المحضر طازجا ون ً علي المزرعة النامیة.المستعمرات السریع إلي الأحمر الداكن علي تفاعل موجب. F Lugol بإذابة الیود (%33.0 (ویودید البوتاسیوم ,66. تضاف نقطة من المحلول إلي المزرعة النامیة في أنبوبة یدل تكون اللون الأزرق الداكن علي وجودعن مركبات النشا بعد أسبوع وبعد أسبوعین من التحضین.G .Candidaھي وسیلة جدیدة انتقائیة، سریعة، وفعالة للتفرقة بین مزارع المبیضات Candida .تستخدم ھذه الوسیلة لعزل بعض أنواع المبیضات Candida المھمة سریرًیا وتحدیدھا باستخدام Candida CHROMagar ،المبیضات على أساس لون المستعمرة. تتمثل المیزة الرئیسیة لـ CHROMagarCandida في قدرتھا على اكتشاف المزارع المختلطة من المبیضات في العیناتالجلد،الحلق،البول،البراز،