لخّصلي

Initiation aux techniques histologiques: Un aperçu

Ce document présente une introduction aux techniques histologiques, expliquant les étapes clés et les principes fondamentaux pour la préparation des échantillons et l'observation microscopique.

Dimensions et Débuts: L'article commence par souligner l'importance de la taille des spécimens et l'impact qu'elle a sur les résultats. Les dimensions appropriées permettent de garantir que les échantillons reflètent la réalité histologique.

Préparation de l'Échantillon: Le document explique ensuite la séquence des étapes de préparation, de la fixation qui préserve la structure cellulaire et durcit le tissu à l'inclusion, qui transforme l'échantillon en bloc solide pour la coupe.

La Coupe et la Coloration: La coupe, réalisée à l'aide d'un microtome, crée des lamelles fines pour l'observation. La coloration, comme la coloration H.E. (Hématoxyline-éosine) ou le trichrome de Masson, utilise des colorants pour différencier les tissus et révéler leurs structures.

Observation Microscopique: Le document conclut en expliquant le principe du grossissement et en introduisant la microscopie optique, une technique clé pour observer les structures tissulaires.

Exercices de Compréhension: Le document propose des exercices pour permettre aux lecteurs de comprendre les résultats des plans de coupe.

Ce document fournit un guide pratique pour comprendre les techniques histologiques et préparer les échantillons pour l'observation microscopique.

TP 1 : Initiation aux techniques
histologiques
Introduction to histological techniques
IL FAUT SE SITUER DANS
L’ESPACE !
• Qu’elle est la taille de la cellule ? Par
rapport à la taille de la bactérie? Du Virus
? D’une simple molécule ???
• Pourquoi le microscope Photonique?
• What is the cell size? the bacteria? Virus?
or a tiny molecule?
• Why do we use the Photonic microscope ,
DIMENSIONS
• 1 millimètre (mm) = 0.001 mètre
• 1 micromètre (µm) = 0.001 millimètre (mm)
• 1 nanomètre (nm) =0.001 micromètre (µm)
• 1 Angstrom(Å) = 0.1 nanomètre (nm)
Par quoi commencer pour
aborder les techniques
histologiques ???
Where is the starting point for
the histological techniques
Le Matériel biologique (Specimen) :
 Prélèvements (Sampling)
 Fixation (Fixation)
 Déshydratation ( dehydration)
 Eclaircissement ( clearing)
 Infiltration/Imprégnation (impregnation)
 Inclusion ou enrobage (inclusion/ Coating)
 Découpage (Thin sectionning)
 Coloration et montage (staining and assembly)
Attention aux plans de
coupe !!!
Be aware of the cut
plane !!!
• Taille du prélèvement (sample size) 2.5 X
2.0X 0.4 cm qui correspond aux
dimensions des cassettes.
• Dépose dans des cassettes.
Une dimension non appropriée entraîne le résultat ci-
dessous:
Lorsque la taille est trop petite: le prélèvement ne reflétera pas le contenu
histologique réel .
Sutures ou agrafes actuelles dans le tissu: Lames et trous pendant le
découpage.
Tissu de cerveau ou de foie placé dans des sacs de maille ou sur des
éponges résultats de trous nombreux formés dans le tissu.
Fragment de tissu trop petit: Enfoncer et sectionner difficile, le tissu peut se
perdre ou détruit pendant le traitement.
Os pas correctement décalcifié: Très difficile à couper, et les sections
peuvent se briser.
Tube de Borel
1.Fixation:
• La fixation préserve les constituants cellulaires et leur
morphologie en empêchant leur destruction par les
enzymes, ou autolyse.
• Elle durcit aussi les tissus en vue de coupes ultérieures.
• Les fixateurs les plus utilisés pour la microscopie optique
et la microscopie électronique sont, respectivement, le
formol neutre tamponné, à 10 %, et la glutaraldéhyde.
Fixation
• Fixation preserves cellular constituents
and their morphology by preventing their
destruction by enzymes, or autolysis.
• It also hardens the tissues for subsequent
cuts.
• The most commonly used fixatives for
optical microscopy and electron
microscopy are, respectively, neutral
buffered formalin 10%, and
glutaraldehyde.
Comment utiliser le fixateur ?
 par immersion
 On trempe directement dans le fixateur des
cubes de tissu de 4 à 5 millimètres de côté ou
l’ensemble de l’organe selon les besoins.
 par perfusion
 On injecter la solution de fixation par
l'intermédiaire du système vasculaire ou à
l’intérieur des canaux et tubes (cas du tractus
digestif)
2.Déshydratation:
• On rince le tissu à l'eau pour éliminer le
fixateur.
• Durant la déshydratation, l'eau est
éliminée progressivement du tissu en vue
de l'infiltration de paraffine ou de résine
époxyde.
• Le déshydratant le plus courant est
l'éthanol, on peut utiliser aussi l'acétone,
et l'alcool isopropylique.
Dehydration
• Rinse the tissue with water to remove the
fixative.
• During dehydration, water is gradually
removed from the tissue in preparation for
infiltration of paraffin or epoxy resin.
• The most common desiccant is ethanol;
acetone and isopropyl alcohol can also be
used.
Les étapes de la déshydratation
Dehydration steps
3.Eclaircissement:
• L'éclaircissement, qui vise à rendre le tissu translucide,
constitue une étape intermédiaire entre la déshydratation
et l'imprégnation.
• Les agents d'éclaircissement sont miscibles, tant avec
les agents de déshydratation qu'avec les agents
d'imprégnation.
• On peut utiliser pour l'éclaircissement le xylène, le
toluène, le benzène, l'huile de cèdre et le chloroforme.
• Les agents de déshydratation et d'éclaircissement
éliminent des tissus, les lipides en laissant des espaces
vides dans la cellule/les tissus.
Clearing
• Aims to make the Tissue translucent,
• It is an intermediate step between dehydration
and impregnation.
• Clearing agents are miscible, both with
dehydrating agents and impregnating agents.
• Xylene, toluene, benzene, cedar oil and
chloroform can be used for the clearing step.
• Dehydrating and clearing agents remove lipids
from tissues, leaving empty spaces in the
cell/tissues.
4.Infiltration/Imprégnation:
• On remplace l'agent d'éclaircissement du tissu par un
agent d'infiltration tel que la paraffine ou la résine
époxyde pour endurcir le tissu en vue de la débiter en
lamelles minces.
Impregnation
The tissue clearing agent is replaced by an
infiltration agent such as paraffin or epoxy
resin to harden the fabric in order to cut it
into thin strips.
5.Inclusion ou enrobage:
• Le tissu est inclus ou enrobé dans un
milieu ou support liquide qui se solidifie
pour former des blocs prêts à la coupe.
• On peut utiliser la cire de paraffine, le
méthacrylate de butyle et la résine
époxyde pour la microscopie optique et
électronique.
Inclusion/Coating
• The tissue is embedded /coated in a liquid
medium which solidifies to form blocks
ready for cutting.
• Paraffin wax, butyl methacrylate and
epoxy resin can be used for optical and
electron microscopy.
La préparation des lames
Thin sections
La coupe
Sectionning
1.Coupes à la paraffine:
• On réalise, sur des tissus enrobés correctement
de cire de paraffine, en utilisant un microtome
rotatif, des coupes à la paraffine d'une épaisseur
de 4 à 7 micromètres aux fins des examens
histologiques courants.
1.The paraffin technique
Paraffin sections with a thickness of 4 to 7
micrometers are made on tissues properly
coated with paraffin wax, using a rotating
microtome, for routine histological
examinations.
Etalement des coupes sur un bain
marie
Water bath Spreading tissue sections
Préparation des échantillons avant
coloration
Preparation of samples before staining
Mode opératoire.(modus operandi)
 Déparaffinage dans un bain de toluène
Dewaxing in a toluene bath
 Réhydratation dans des bains d’alcool à
gradient décroissant ( 100°,puis 90°et
ensuite 80°)
Rehydration in alcohol baths with decreasing
gradient (100°, then 90°, then 80°)
 Rinçage à l’eau pour enlever tout l ’alcool
Coloration
Déshydratation
La coloration
Staining
• La coloration ou marquage a pour objet d'accentuer les
contrastes des tissus grâce à la couleur.
• The purpose of staining or labeling is to accentuate the
contrasts of tissues using stains.
• Les colorants: des teintures naturelles (ex:
hématoxyline) ou synthétiques (ex: éosine) qui
réagissent en présence de divers organites cellulaires ou
matériel extracellulaire.
• Stains : natural (e.g.: hematoxylin) or synthetic (e.g.:
eosin), react in the presence of various cellular
organelles or extracellular material
• La coloration de Routine (H.E):
-Noyaux: bleu noirs ( basophile ). Hematoxyline stains Nuclei purple
-Cytoplasmes: rose ( acidophile ). Eosin stains protein pink
• La coloration au trichrome de Masson:
-Noyau: brun. Dark Nuclei
-Cytoplasmes: soit rose ( muscle ), soit rose vert ( foie ).
-Conjonctif (collagène de type I): soit bleu , soit vert. Connective tissue
stained green or blue
Lavage à l’eau
Déshydratation avec de l’alcool à 100°
Eclaircissement dans un bain de toluène
Grossissement
Magnification
• Le grossissement est l'agrandissement de
l'image optique.
• Magnification is the enlargement of the
optical image.
Microscopie optique
Optical microscopy
• Le microscope optique utilise un objectif multiple
pour localiser la lumière et former une image.
• The optical microscope uses a multiple objective
lens to locate light and form an image.
• On examine les tissus en transmettant la lumière
à travers les coupes colorées des tissus.
• Tissues are examined by transmitting light
through stained sections of the tissue.
La coloration de Routine
(Hématoxyline . Eosine)
Hemotoxyline eosin Stain
La coloration au Trichrome de Masson
Masson Trichrome Stain
Exercices de compréhension
des résultats des plans de
coupes
Exercises for understanding the
results of cutting plans