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La méthode Kjeldahl détermine la teneur en protéines en trois étapes : 1) Digestion : l'azote protéique est transformé en ammoniac (NH3) par oxydation dans de l'acide sulfurique concentré, à chaud, avec un catalyseur et du K2SO4 (pour augmenter le point d'ébullition). 2) Distillation : l'ammoniac est libéré par ajout de NaOH, puis distillé et piégé dans de l'acide borique, formant des borates d'ammonium. 3) Titrage : les borates d'ammonium sont titrés avec un acide standardisé (HCl ou H2SO4), après réalisation d'un blanc pour corriger l'ammoniac des réactifs.
La détermination des protéines par la méthode Kjeldahl s'effectue en trois étapes : Étape 1 : Digestion ou minéralisation de l'échantillon Pendant l'étape de la digestion , l'azote protéique est transformé en azote ammoniacal par oxydation de la matière organique dans l'acide sulfurique concentré à haute température , en présence d'un catalyseur et d'un sel : -l'acide sulfurique concentré a pour but d'oxyder la matière organique et de transformer l'azote protéique en ammoniac NH3 . -II sert également à piéger l'ammoniac gazeux sous la forme de sulfate d'ammonium , par action de la base avec l'acide : -l'addition du sel K2SO4 a pour but d'élever le point d'ébullition de la solution pour accélérer la réaction de minéralisation de la matière organique . Étape 2 : Distillation de l'ammoniac Avant de distiller l'ammoniac à la vapeur d'eau , on doit libérer l'ammoniac sous la forme du sel ( NH4 ) 2SO4 par l'addition d'une solution concentrée de NaOH en excès : L'ammoniac est ensuite distillée par la vapeur d'eau et piégée dans une solution d'acide borique . L'ammoniac réagit avec l'acide borique pour former des sels borates d'ammonium : Étape 3 : Titrage de l'ammoniac L'ammoniac sous la forme de borates d'ammonium est titré directement à l'aide d'une solution standardisée d'acide , tel HCI ou H2SO4 , et d'un indicateur : - On fait un blanc en mettant tous les réactifs sauf l'échantillon , pour soustraire l'ammo- niac contenu dans les réactifs de l'ammoniac contenu dans l'échantillon .
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