2. Amplification in ...

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2- Borner et amorcer la replication de la sequence a amplifier a l'aide d'oligonucleotides amorces specifiques : hybridation (qui est un appariement entre des bases complementaires amorce-partie ADN a amplifier a l'aide de l'ADN ligase, elle se fait a une temperature qui sera definie selon la nature des amorces (cette temperature varie de 50 a 60?C).A la fin de chaque cycle, les produits sont sous forme d'ADN double brin : polymerisation est a environ 72?C, temperature de << travail >> de l'ADN polymerase thermoresistante utilisee. Le nombre de cycle est defini par l'experimentateur selon le degre d'amplification souhaite, dans la plupart des cas, ce nombre est d'environ 30 (un facteur d'amplification de l'ordre de 230).Au cours de cette etape, les brinscomplementaires d'ADN sont synthetises a partir des extremites 3'OH libre des amorces hybridees.

Original text

Amplification in vitro des acides nucléiques PCR (Polymerase Chain
Reaction) et RT-PCR (Reverse Transcription PCR)
2.1. PCR
La réaction PCR (Polymerase Chain Reaction) permet d'amplifier in vitro une région
spécifique d'un acide nucléique donné afin d'en obtenir une quantité suffisante pour le
détecter et l’étudier.
Pour avoir réplication d’un ADN double brin, il faut agir en trois étapes.
1- Il faut dénaturer l’ADN pour obtenir des matrices simple brin : dénaturation est
réalisée à environ 95°C.
2- Borner et amorcer la réplication de la séquence à amplifier à l’aide
d’oligonucléotides amorces spécifiques : hybridation (qui est un appariement entre
des bases complémentaires amorce-partie ADN à amplifier à l’aide de l’ADN
ligase, elle se fait à une température qui sera définie selon la nature des amorces (cette
température varie de 50 à 60°C).
3- Réaliser la réaction de polymérisation du brin complémentaire à l’aide de ADN
polymérase. A la fin de chaque cycle, les produits sont sous forme d'ADN double brin
: polymérisation est à environ 72°C, température de « travail » de l’ADN
polymérase thermorésistante utilisée. Au cours de cette étape, les brinscomplémentaires d’ADN sont synthétisés à partir des extrémités 3’OH libre des
amorces hybridées.
Le nombre de cycle est défini par l’expérimentateur selon le degré d’amplification
souhaité, dans la plupart des cas, ce nombre est d’environ 30 (un facteur d’amplification
de l’ordre de 230).

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