Lakhasly

Materials and Methods- المواد وطرائق العمل 3 اجريت التجربة في محافظة القادسية /ناحية الشافعية /في احدى الاراضي الزراعية التابعة لدائرة غابات النورية و التي تبعد 10 كم عن مركز المحافظة الواقعة ضمن خط طول ( 31. صممت التجربة وفق تصميم القطاعات العشوائية الكامل (RCBD) على مساحة تبلغ 975 م2 وقسم الحقل الى ثلاث قطاعات وبواقع 48 وحدة تجريبية وكل قطاع يضم 16 معاملة وزعت عشوائيا. 3-3-1 العامل الاول : اللقاح الفطري (Glomus mosseae): ويكون على مستويين 3-3-2 العامل الثاني : اللقاح الفطري (Tricoderma harzianum) : ويكون على مستويين 3-3-3 العامل الثالث : الصخر الفوسفاتي : و يكون على اربعة مستويات جدول (1) معاملات التجربة وتوصياتها 1 G0 T0 P0 عدم التلقيح بفطر ( ( G. 3 G0 T0 P2 عدم التلقيح بفطر ( ( G. 4 G0 T0 P3 عدم التلقيح بفطر ( ( G. 6 G1 T0 P1 التلقيح بفطر ( ( G. 7 G1 T0 P2 التلقيح بفطر ( ( G. 8 G1 T0 P3 التلقيح بفطر ( ( G. 9 G0 T1 P0 عدم التلقيح بفطر ( ( G. 10 G0 T1 P1 عدم التلقيح بفطر( ( G. 11 G0 T1 P2 عدم التلقيح بفطر ( ( G. 12 G0 T1 P3 عدم التلقيح بفطر ( ( G. 13 G1 T1 P0 التلقيح بفطر ( ( G. 14 G1 T1 P1 التلقيح بفطر ( ( G. 15 G1 T1 P2 التلقيح بفطر ( ( G. 16 G1 T1 P3 التلقيح بفطر ( ( G. 3-4 خصائص التربة الفيزيائية و الكيميائية و الحيوية قبل الزراعة تم أخذ عينات من التربة الخاصة بالحقل قبل الزراعة من جهات متعددة و بعمق ( 0- 30 ) سم و تم خلطها لعمل عينة مركبة تمثل تربة الحقل ثم تم تجفيف العينة هوائياً و طحنها جيداً و نخلها من خلال منخل قطر فتحاته 2 ملم لإجراء الفحوصات الفيزيائية و الكيميائية و اخذ تربة رطبة لأجراء التقديرات الحيوية كما هو مبين في جدول ( 2). جدول (2) بعض الخصائص الفيزيائية والكيميائية والحيوية لتربة الحقل قبل الزراعة مفصولات التربة رمل Sand 215 غم كغم تربة-1 نسجة التربة مزيجة طينية Clay Loam الايصالية الكهربائية EC1:1 2. درجة التفاعل pH 7. المادة العضوية OM 8. النتروجين الجاهز N 10. الفسفور الجاهز P 8. البوتاسيوم الجاهز K 196. الايونات الموجبة الذائبة Ca+2 9. الايونات السالبة الذائبة SO4-2 11. 3-5-1 فطر Glomus mosseae تم الحصول على اللقاح الفطري Glomus mosseae من مركز الامين للأبحاث و التقانات الاحيائية المتقدمة التابع للعتبة العلوية المقدسة - النجف الاشرف - والمتكون من (رمل – جذورمصابة - سبورات) Tricoderma harzianum فطر 2-5-3 تم الحصول على اللقاح الفطري Tricoderma harzianum من مركز الامين للأبحاث و التقانات الاحيائية المتقدمة التابع للعتبة العلوية المقدسة - النجف الاشرف - على شكل سائل حجمه 500 مل. 3-6 تلقيح البذور وزراعتها عقمت البذور سطحيا باستخدام كلوريد الزئبق HgCl2 و الكحول الاثيلي 95% وفق ما ذكره (Vincent ، ثم لقحت بذور الشعير باضافة (8 غم من الصمغ العربي في 100 مل ماء( في وعاء حاوي على البذور و تركت لمدة 10 دقائق ثم تم تجفيفها هوائيا ، تمت عملية زراعة الحقل في يوم ( 2021-10-15 ) و بكمية بذور 120 )كغم هـ(1- و بواقع 108 غم لكل وحدة تجريبية ( الهيئة العامة للبحوث الزراعية ، 3-7 اضافة التوصية السمادية أضيفت التوصية السمادية بمعدل (100-0-80) كغم هـ1- (N-P2O5-K) وأستخدم اليوريا (N%46) كمصدر للنتروجين وسماد كبريتات البوتاسيوم ( ( K%52 كمصدر للبوتاسيوم ، وكذلك تم اضافة اليوريا 100 كغم N هـ1- على دفعتين الأولى عند الزراعة و الثانية عند مرحلة التزهير ( علي و آخرون ، و اثناء الموسم الزراعي تم ري ارض التجربة حسب الحاجة وكذلك عشب الحقل لإزالة الأدغال كلما دعت الحاجة، 3-8 التقديرات الفيزيائية و الكيميائية 3-8-1 نسجه التربة Soil Texture قدرت مفصولات التربة بطريقة الماصة وحسب ما ورد في ( Black ، 3-8-2 درجة تفاعل التربة pH تم عمل معلق تربة و ماء بنسبة 1:1 وقيس فيه درجة التفاعل باستعمال جهاز pH-meter حسب ما وصف في Page ) و آخرون، 3-8-3 التوصيل الكهربائي EC قدرت في مستخلص تربة : ماء ( 1:1 ) باستخدام جهاز EC-meter حسب الطريقة المذكورة في ) Richards ، 3-8-4 الكالسيوم و المغنيسيوم
تم تقديرها بالتسحيح مع مادة الفرسنيت (0. 01 N) ( EDTA) وحسب ما جاء في) Richards ، 3-8-5 الكاربونات و البيكاربونات 01 N) باستعمال دليلي الفينونفثالين و المثيل البرتقالي حسب ) Richards ، قدرت بطريقة العكارة باستعمال جهاز Spectrophotometer حسب ما ورد في ( Page و آخرون ، قدر الصوديوم والبوتاسيوم بجهاز اللهب Flamphotometer وحسب ما ورد في Page ) و آخرون، تم تقدير الفسفور الذائب بطريقة (Ascorbic acid) وباستعمال جهاز Spectrophotometer قدر بطريقة الاستخلاص بواسطة KCl ذات عيارية 2N حسب طريقة Black ) ، أستخلص بوتاسيوم التربة الجاهز بأستخدام محلول (1M NH4OAC) ثم قدر البوتاسيوم المستخلص بوسطة جهاز مقياس اللهب Flamephotomater حسب طريقة Knudsen كما ورد في (1965b, 3-8-11 الزنك و الحديد قدرت بجهاز التحليل الطيفي بالامتصاص الذري (Atomic Obsorpition) حسب طريقة 1965b, قدر الكاربون العضوي في التربة بطريقة Walkey - Black وذلك بأكسدة المادة العضوية بدايكرومات البوتاسيوم بوجود حامض الكبريتيك ثم التسحيح مع كبريتات الحديدوز الأمونياكية الموصوفة في ( Page و آخرون ، تم تقدير أعداد الفطريات بطريقة التخافيف والعد بالأطباق باستعمال وسط PDA وبحسب ما ورد في Black ) ، 3-9-2 نسبة الاصابة بالفطر Glomus mosseae ( % ). وقدرت نسبة أصابة الجذور% بالمايكورايزا بعد تصبيغ الجذور حسب طريقة kormanik) وآخرون , أولاً :تحضيرمحلول صبغة Acid fuchsin من المواد التالية: حامض الخليك 875 مل و كليسرول 63 مل و ماء مقطر 63 مل و مسحوق صبغة Acid fuchsin 0. ثانيا :تقدير نسبة أصابة الجذور Glomus mosseae (%) أضيف محلول هيدروكسيد البوتاسيومKOH وبتركيز 10 % إلى قطع الشعيرات الجذرية, ثم وضعت في حمام مائي حرارتهُ 90 مO لمدة (15-10) دقيقه , قصرت الشعيرات الجذرية بإستخدام H2O2 القاعدي وبتركيز 10% لمدة) 15-60 ( ثانيه أضيف حامض الهيدروكلوريك HCL , A.A) Formalin المتكون من (5% الفورمالين +5% كحول الاثلين +36% حامض الخليك + 54 مل ماء مقطر ) لحين أجراء التصبيغ للحفاظ على التراكيب الفطرية من التغير المورفولوجي . 3-9-3 اعداد فطر الترايكوديرما ) CFU غم تربة1- جافة( تم عد فطر الترايكوديرما من التربة و ذلك بسلسلة من تخافيف التربة من 10-1 إلى 10-3 بأخذ 1 غرام تربة و اضافتها إلى 9 مل ماء مقطر معقم ، ثم اخذ 1 مل منه الى انبوبة اختبار تحتوي 9 مل ماء مقطر معقم و هكذا وصولا الى التخفيف 10-3 ، 1 مل من التخفيف 10-3 و نشره على سطح طبق بتري يحتوي وسط تنمية الفطريات (PDA) ، و من ثم تحريك الطبق حركة دائرية و بثلاثة مكررات ، ثم وضع الأطباق في الحاضنة لمدة( 5-(7 يوما ، ثم لعد المستعمرات الفطر نستخدم جهاز Colony Counterفي كل المكررات و حسب المعادلة الاتية1965b, عد الفطريات في 1 غم تربة = معدل عدد المستعمرات في الاطباق × مقلوب التخفيف 3-9-4 عدد ابواغ فطر Glomus mosseae ( سبور 100 غم تربة ) بطريقة النخل الرطب والتنقية ( Gerdemann و Nicolsan ، 3-10 تقدير محتوى المجموع الخضري من ( N، تم أخذ خمس نباتات بصورة عشوائية من كل وحدة تجريبية وتم تنظيفها للتخلص من الاتربة العالقة بها وغسلت بالماء المقطر ثم تم تجفيفها في الفرن على درجة 65 م ثم طحنت بطاحونة كهربائية ونخلت ثم هضمت بالطريقة المذكورة من قبل( Nowosielski، 2 غم من العينات في بيكر ثم اضيف له 3 مل من حامض الكبريتيك وترك لمدة 24 ساعة ثم اضيف له 1 مل مل من خليط حامض الكبريتيك وحامض البيروكلوريك 70% سخن لحين الحصول على محلول رائق ثم اكمل الحجم بالماء المقطر الى 100 مل ، 3-11 تقدير نسبة البروتين % تم اخذ 2 غم عينة مجففة ومطحونة من البذور وهضمت حسب طريقة ( Cresserو Parsons، 1979) ثم قدرت النسبة المئوية للنتروجين بجهاز كلدال Micro Kjeldahl وحسبت النسبة المئوية للبروتين حسب المعادلة التالية : البروتين % = النتروجين % × 6. تم أخذ 2 غم عينة تربة و اضيف لها 20 مل خلات الاثيل + 10 مل ماء مقطر وقطرات من هیدروکسید البوتاسيوم 1 N ووضعت على جهاز التسخين (Hot plate ) بدرجة حرارة 45 مئوية لمدة ساعتين ثم نقلت الى قمع الفصل ورجت جيدا، 3-13 القياسات النباتية الحقلية 3-13-1 الوزن الجاف للمجموع الخضري و الجذري (غم نبات-1) بعد قطع المجموع الخضري تم أخذ المجموع الجذري للنبات ووضع في أكياس من الورق وكتبت عليها رموز المعاملات الخاصة بها ثم جففت بال OVEN على درجة حرارة 65 م لحين ثبات الوزن ثم حساب وزن المجموع الجذري الجاف باستخدام الميزان الحساس . 3-13-2 الحاصل الكلي (ميكا غرام ه1- ) تم حساب الحاصل الكلي من المعادلة التالية: الحاصل الكلي = حاصل الوحدة التجريبية ×1000 / مساحة الوحدة التجريبية × 10000
اجري التحليل الاحصائي للصفات المدروسة طبقا لطريقة تحليل التباين للتجارب العاملية وفق تصمیم القطاعات العشوائية الكاملة R.

Materials and Methods- المواد وطرائق العمل 3

موقع التجربة 1-3
اجريت التجربة في محافظة القادسية /ناحية الشافعية /في احدى الاراضي الزراعية التابعة لدائرة غابات النورية و التي تبعد 10 كم عن مركز المحافظة الواقعة ضمن خط طول ( 31.94 N) ، ودائرة عرض ( 44.78 E ) غربا، في تربة مزيجيه طينية لزراعة نبات الشعير (Hordium Valgari L.) صنف )سمير 1 (خلال الموسم الزراعي ( 2022 ) ، حرثت ارض التجربة حراثتين متعامدتين بواسطة المحراث المطرحي القلاب، ثم اجريت عمليتي التنعيم والتسوية للتربة وازالة الادغال والحشائش من اجل تهيئتها للزراعة
3-2 تصميم التجربة
صممت التجربة وفق تصميم القطاعات العشوائية الكامل (RCBD) على مساحة تبلغ 975 م2 وقسم الحقل الى ثلاث قطاعات وبواقع 48 وحدة تجريبية وكل قطاع يضم 16 معاملة وزعت عشوائيا. مساحة الوحدة التجريبية 9 م2 ابعادها( 3 × 3 )م. كل وحدة تجريبية تحتوي على 10 خطوط زراعية فتحت يدويا وبعمق لا يتجاوز 5 سم على طول الوحدة التجريبية والمسافة بين كل خط واخر 30 سم. وتركت مسافة فاصلة بين كل قطاع تبلغ 1 م ويفصل بين كل وحدة تجريبية عن الاخرى مسافة 1م. وترك مساحة 2 م فارغة على جانبي الحقل

3-3 عوامل التجربة
3-3-1 العامل الاول : اللقاح الفطري (Glomus mosseae): ويكون على مستويين
G0 . عدم التلقيح بواسطة فطر G. mosseae
G1 . التلقيح بواسطة فطر G. mosseae

3-3-2 العامل الثاني : اللقاح الفطري (Tricoderma harzianum) : ويكون على مستويين
T0 . عدم التلقيح بواسطة فطر T. harzianum
T1 . التلقيح بواسطة فطر T. harzianum

3-3-3 العامل الثالث : الصخر الفوسفاتي : و يكون على اربعة مستويات
P0 . المستوى الاول )0 كغم هـ1-)
P1 . المستوى الثاني )010 كغم هـ1-)
P2 . المستوى الثالث )015 كغم ه1-)
P3 . المستوى الرابع )020 كغم ه1-)

جدول (1) معاملات التجربة وتوصياتها
الرقم الرمز المعاملة
1 G0 T0 P0 عدم التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + عدم التلقيح بفطر ( T. harzianum) + بدون إضافة سماد الصخر الفوسفاتي
2 G0 T0 P1 عدم التلقيح بفطر ( ( G. mosseae+ عدم التلقيح بفطر ( T. harzianum ) + إضافة (100 كغم ه1- ) سماد الصخر الفوسفاتي
3 G0 T0 P2 عدم التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + عدم التلقيح بفطر ( T. harzianum ) + إضافة( 150 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
4 G0 T0 P3 عدم التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + عدم التلقيح بفطر ( T. harzianum ) + إضافة( 200 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
5 G1 T0 P0 التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + عدم التلقيح بفطر( T. harzianum) + بدون إضافة سماد الصخر الفوسفاتي
6 G1 T0 P1 التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + عدم التلقيح بفطر ( T. harzianum )+إضافة( 100 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
7 G1 T0 P2 التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + عدم التلقيح بفطر ( T. harzianum) +إضافة( 150 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
8 G1 T0 P3 التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + عدم التلقيح بفطر ( T. harzianum) +إضافة( 200 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
9 G0 T1 P0 عدم التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + التلقيح بفطر ( T. harzianum ) + بدون إضافة سماد الصخر الفوسفاتي
10 G0 T1 P1 عدم التلقيح بفطر( ( G. mosseae + التلقيح بفطر ( T. harzianum )+إضافة( 100 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
11 G0 T1 P2 عدم التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + التلقيح بفطر ( T. harzianum )+إضافة( 150 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
12 G0 T1 P3 عدم التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + التلقيح بفطر ( T. harzianum )+إضافة( 200 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
13 G1 T1 P0 التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + التلقيح بفطر ( T. harzianum ) + بدون إضافة سماد الصخر الفوسفاتي
14 G1 T1 P1 التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + التلقيح بفطر ( T. harzianum )+إضافة( 100 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
15 G1 T1 P2 التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + التلقيح بفطر ( T. harzianum )+إضافة( 150 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي
16 G1 T1 P3 التلقيح بفطر ( ( G. mosseae + التلقيح بفطر ( T. harzianum )+إضافة( 200 كغم هـ1-) سماد الصخر الفوسفاتي

3-4 خصائص التربة الفيزيائية و الكيميائية و الحيوية قبل الزراعة
تم أخذ عينات من التربة الخاصة بالحقل قبل الزراعة من جهات متعددة و بعمق ( 0- 30 ) سم و تم خلطها لعمل عينة مركبة تمثل تربة الحقل ثم تم تجفيف العينة هوائياً و طحنها جيداً و نخلها من خلال منخل قطر فتحاته 2 ملم لإجراء الفحوصات الفيزيائية و الكيميائية و اخذ تربة رطبة لأجراء التقديرات الحيوية كما هو مبين في جدول ( 2).
جدول (2) بعض الخصائص الفيزيائية والكيميائية والحيوية لتربة الحقل قبل الزراعة
الصفة القيمة الوحدة
مفصولات التربة رمل Sand 215 غم كغم تربة-1
غرين Silt 410
طينClay 375
نسجة التربة مزيجة طينية Clay Loam
الايصالية الكهربائية EC1:1 2.7 ديسي سيمنز م-1
درجة التفاعل pH 7.7 -
المادة العضوية OM 8.4 غم كغم تربة-1
النتروجين الجاهز N 10.24 ملغم كغم تربة-1
الفسفور الجاهز P 8.3
البوتاسيوم الجاهز K 196.14
الزنك Zn 0.12 ملغم Zn كغم1- تربة
الحديد Fe 2.33 ملغم Fe كغم1- تربة
الايونات الموجبة الذائبة Ca+2 9.6 ملي مول لتر-1
Mg+2 10.2
Na+ 13.9
K+ 0.2
الايونات السالبة الذائبة SO4-2 11.3
HCO3 12.4
CO3-2 Nill
الفطريات الكلية 1.28 X 103 CFU غم تربة1- جافة

3-5 اللقاحات الحيوية
3-5-1 فطر Glomus mosseae
تم الحصول على اللقاح الفطري Glomus mosseae من مركز الامين للأبحاث و التقانات الاحيائية المتقدمة التابع للعتبة العلوية المقدسة - النجف الاشرف - والمتكون من (رمل – جذورمصابة - سبورات)
Tricoderma harzianum فطر 2-5-3
تم الحصول على اللقاح الفطري Tricoderma harzianum من مركز الامين للأبحاث و التقانات الاحيائية المتقدمة التابع للعتبة العلوية المقدسة - النجف الاشرف - على شكل سائل حجمه 500 مل.
3-6 تلقيح البذور وزراعتها
عقمت البذور سطحيا باستخدام كلوريد الزئبق HgCl2 و الكحول الاثيلي 95% وفق ما ذكره (Vincent ،1970) ، ثم غسلت جيدا بالماء المقطر 4 مرات للتخلص من اثار الكحول ،ثم لقحت بذور الشعير باضافة (8 غم من الصمغ العربي في 100 مل ماء( في وعاء حاوي على البذور و تركت لمدة 10 دقائق ثم تم تجفيفها هوائيا ، ثم وضعت في 500 مل من المزرعة السائلة لفطر Tricoderma harzianum ، ثم تركت لمدة 15 دقيقة لضمان نجاح الالتصاق ،ثم زرعت مباشرةً، اما فطر Glomus mosseae فان عمليه اضافتة اثناء الزراعة على السطح الخارجي للبذور ، تم زراعة البذور غير الملقحة في البداية لتجنب التلوث ، تمت عملية زراعة الحقل في يوم ( 2021-10-15 ) و بكمية بذور 120 )كغم هـ(1- و بواقع 108 غم لكل وحدة تجريبية ( الهيئة العامة للبحوث الزراعية ، 2011).

3-7 اضافة التوصية السمادية
أضيفت التوصية السمادية بمعدل (100-0-80) كغم هـ1- (N-P2O5-K) وأستخدم اليوريا (N%46) كمصدر للنتروجين وسماد كبريتات البوتاسيوم ( ( K%52 كمصدر للبوتاسيوم ، حيث تم اضافة سماد كبريتات البوتاسيوم 80 كغم K هـ-1 - اثناء عملية الزراعة ، وكذلك تم اضافة اليوريا 100 كغم N هـ1- على دفعتين الأولى عند الزراعة و الثانية عند مرحلة التزهير ( علي و آخرون ، 2014 ) ، و اثناء الموسم الزراعي تم ري ارض التجربة حسب الحاجة وكذلك عشب الحقل لإزالة الأدغال كلما دعت الحاجة،وتم اضافة سماد الصخر الفوسفاتي بعد طحنة وتنعيمه تلقيما على خطوط الوحدات التجريبية المستهدفة اثناء عملية الزراعة.
3-8 التقديرات الفيزيائية و الكيميائية
3-8-1 نسجه التربة Soil Texture
قدرت مفصولات التربة بطريقة الماصة وحسب ما ورد في ( Black ،1965a )
3-8-2 درجة تفاعل التربة pH
تم عمل معلق تربة و ماء بنسبة 1:1 وقيس فيه درجة التفاعل باستعمال جهاز pH-meter حسب ما وصف في Page ) و آخرون، 1982 ).
3-8-3 التوصيل الكهربائي EC
قدرت في مستخلص تربة : ماء ( 1:1 ) باستخدام جهاز EC-meter حسب الطريقة المذكورة في ) Richards ، 1954 ).
3-8-4 الكالسيوم و المغنيسيوم

تم تقديرها بالتسحيح مع مادة الفرسنيت (0.01 N) ( EDTA) وحسب ما جاء في) Richards ، 1954 ).

3-8-5 الكاربونات و البيكاربونات
تم تقديرها مع محلول حامض الكبريتيك (0.01 N) باستعمال دليلي الفينونفثالين و المثيل البرتقالي حسب ) Richards ، 1954 ).
3-8-6 الكبريتات
قدرت بطريقة العكارة باستعمال جهاز Spectrophotometer حسب ما ورد في ( Page و آخرون ،1982 ).
3-8-7 الصوديوم والبوتاسيوم
قدر الصوديوم والبوتاسيوم بجهاز اللهب Flamphotometer وحسب ما ورد في Page ) و آخرون، 1982 ).
3-8-8 الفسفور الجاهز
تم تقدير الفسفور الذائب بطريقة (Ascorbic acid) وباستعمال جهاز Spectrophotometer
Page ) و آخرون، 1982 ).
3-8-9 النتروجين الجاهز
قدر بطريقة الاستخلاص بواسطة KCl ذات عيارية 2N حسب طريقة Black ) ،1965b ).
3-8-10 البوتاسيوم الجاهز
أستخلص بوتاسيوم التربة الجاهز بأستخدام محلول (1M NH4OAC) ثم قدر البوتاسيوم المستخلص بوسطة جهاز مقياس اللهب Flamephotomater حسب طريقة Knudsen كما ورد في (1965b, Black ).
3-8-11 الزنك و الحديد
قدرت بجهاز التحليل الطيفي بالامتصاص الذري (Atomic Obsorpition) حسب طريقة 1965b,Black) ).

3-8-12 المادة العضوية
قدر الكاربون العضوي في التربة بطريقة Walkey - Black وذلك بأكسدة المادة العضوية بدايكرومات البوتاسيوم بوجود حامض الكبريتيك ثم التسحيح مع كبريتات الحديدوز الأمونياكية الموصوفة في ( Page و آخرون ،1982 ) ، وتحسب المادة العضوية بضرب النسبة المئوية للكاربون العضوي بالمعامل 1.72
3-9 التقديرات الحيوية
3-9-1 الفطريات في التربة
تم تقدير أعداد الفطريات بطريقة التخافيف والعد بالأطباق باستعمال وسط PDA وبحسب ما ورد في Black ) ،1965 ).

3-9-2 نسبة الاصابة بالفطر Glomus mosseae ( % ).
وقدرت نسبة أصابة الجذور% بالمايكورايزا بعد تصبيغ الجذور حسب طريقة kormanik) وآخرون ,1980) بأتباع الخطـــــــوات التـــاليــة :
أولاً :تحضيرمحلول صبغة Acid fuchsin من المواد التالية:
حامض الخليك 875 مل و كليسرول 63 مل و ماء مقطر 63 مل و مسحوق صبغة Acid fuchsin 0.1 غم
ثانيا :تقدير نسبة أصابة الجذور Glomus mosseae (%)
بعد قلع ثلاث مجاميع جذرية بشكل عشوائي من كل وحدة تجريبية غُسلت تحت الماء بصورة هادئة للتخلص من التربة الملتصقة بالجذور , ثم أخذت قطع من الشعيرات الجذريه بطول 1 سم ووضعت القطع في أنابيب أخــــــتبــــار نظـــيفـــــــة ومـعــــقـمـة.
أضيف محلول هيدروكسيد البوتاسيومKOH وبتركيز 10 % إلى قطع الشعيرات الجذرية, ثم وضعت في حمام مائي حرارتهُ 90 مO لمدة (15-10) دقيقه , ثم غسلت بالماء المقطر .
قصرت الشعيرات الجذرية بإستخدام H2O2 القاعدي وبتركيز 10% لمدة) 15-60 ( ثانيه أضيف حامض الهيدروكلوريك HCL , وبتركيز 10 % لمده 3 دقائق.أستخدم محلول (F.A.A) Formalin المتكون من (5% الفورمالين +5% كحول الاثلين +36% حامض الخليك + 54 مل ماء مقطر ) لحين أجراء التصبيغ للحفاظ على التراكيب الفطرية من التغير المورفولوجي .
أضيفت صبغة Acid Fuchsin حمراء اللون والمحضرة مسبقاً إلى العينات ثم وضعت في حمام مائي بدرجة حرارة 90 مo لمدة (10-15) دقيقة ثم آستخرجت الجذور من محلول الصبغة , ثم أضيف إليها حامض اللاكتيك Lactic acid وفحصت العينات مجهرياً بأستعمال الشريحة الزجاجية تحت المجهر بعدسة x10ولعشرة قطع أختيرت عشوائياً , ثم حسبت النسبة المئوية للأصابة بحسب المعادلة الاتية : نسبة أصابة الجذور بالميكورايزا (%) = عدد القطع الجذريه المصابة /المجموع الكلي للقطع الجذريه × 100
3-9-3 اعداد فطر الترايكوديرما ) CFU غم تربة1- جافة(
تم عد فطر الترايكوديرما من التربة و ذلك بسلسلة من تخافيف التربة من 10-1 إلى 10-3 بأخذ 1 غرام تربة و اضافتها إلى 9 مل ماء مقطر معقم ، ثم اخذ 1 مل منه الى انبوبة اختبار تحتوي 9 مل ماء مقطر معقم و هكذا وصولا الى التخفيف 10-3 ، ثم اخذ 0.1 مل من التخفيف 10-3 و نشره على سطح طبق بتري يحتوي وسط تنمية الفطريات (PDA) ، و من ثم تحريك الطبق حركة دائرية و بثلاثة مكررات ،ثم وضع الأطباق في الحاضنة لمدة( 5-(7 يوما ، ثم لعد المستعمرات الفطر نستخدم جهاز Colony Counterفي كل المكررات و حسب المعادلة الاتية1965b, Black ) ).
عد الفطريات في 1 غم تربة = معدل عدد المستعمرات في الاطباق × مقلوب التخفيف

3-9-4 عدد ابواغ فطر Glomus mosseae ( سبور 100 غم تربة )
تم قياس نسبة ابواغ فطر Glomus mossa في نهاية الموسم ، بطريقة النخل الرطب والتنقية ( Gerdemann و Nicolsan ، 1963) .

3-10 تقدير محتوى المجموع الخضري من ( N، P، K، Zn،( Fe لفترتي التزهير و نهاية الموسم
تم أخذ خمس نباتات بصورة عشوائية من كل وحدة تجريبية وتم تنظيفها للتخلص من الاتربة العالقة بها وغسلت بالماء المقطر ثم تم تجفيفها في الفرن على درجة 65 م ثم طحنت بطاحونة كهربائية ونخلت ثم هضمت بالطريقة المذكورة من قبل( Nowosielski،1974) باستخدام الاحماض المركزة في عملية الهضم حيث تم وزن 0.2 غم من العينات في بيكر ثم اضيف له 3 مل من حامض الكبريتيك وترك لمدة 24 ساعة ثم اضيف له 1 مل مل من خليط حامض الكبريتيك وحامض البيروكلوريك 70% سخن لحين الحصول على محلول رائق ثم اكمل الحجم بالماء المقطر الى 100 مل ، ثم قدر النتروجين الكلي في محلول الهضم باستخدام جهاز كلدال Micro Kjeldahl بعد اضافة NaOH للعينات حسب طريقة Bremmer) ،(1965 كما قدر الفسفور باستخدام محلول فاندات - مولبيدات الامونيوم ثم قيست نسبة الفسفور بجهاز Spectrophotometer وقدر البوتاسيوم في محلول الهضم بجهاز .photometer

3-11 تقدير نسبة البروتين %
تم اخذ 2 غم عينة مجففة ومطحونة من البذور وهضمت حسب طريقة ( Cresserو Parsons،1979) ثم قدرت النسبة المئوية للنتروجين بجهاز كلدال Micro Kjeldahl وحسبت النسبة المئوية للبروتين حسب المعادلة التالية : البروتين % = النتروجين % × 6.25 .

3-12 تقدير IAA
تم أخذ 2 غم عينة تربة و اضيف لها 20 مل خلات الاثيل + 10 مل ماء مقطر وقطرات من هیدروکسید البوتاسيوم 1 N ووضعت على جهاز التسخين (Hot plate ) بدرجة حرارة 45 مئوية لمدة ساعتين ثم نقلت الى قمع الفصل ورجت جيدا، وتم أخذ الطبقة العضوية وتمت معادلة الحامضية
3-2.5 ثم تم تمرير الطبقة العضوية على كبريتات الصوديوم اللامائية، ثم نقل النموذج الى المبخر الدوار لتبخير المذيب ويضاف له 5 مل اسيتونا بتريل لحقنها في جهاز HPLC حسب ماجاء في Bhalla) وآخرون ،2010) .

3-13 القياسات النباتية الحقلية
3-13-1 الوزن الجاف للمجموع الخضري و الجذري (غم نبات-1)
في نهاية الموسم تم أخذ خمس نباتات من كل وحده تجريبية حيث تم استخراج النبات بصورة كاملة وبعناية وقد تم قطع المجموع الخضري فقط ووضعت في اكياس من الورق وكتبت عليها رموز المعاملات الخاصة بها، ثم جففت بالفرن (OVEN) على درجة حرارة 65 م لحين ثبات الوزن ثم حساب وزن المجموع الخضري الجاف باستخدام الميزان الحساس ،بعد قطع المجموع الخضري تم أخذ المجموع الجذري للنبات ووضع في أكياس من الورق وكتبت عليها رموز المعاملات الخاصة بها ثم جففت بال OVEN على درجة حرارة 65 م لحين ثبات الوزن ثم حساب وزن المجموع الجذري الجاف باستخدام الميزان الحساس .

3-13-2 الحاصل الكلي (ميكا غرام ه1- )
تم حساب الحاصل الكلي من المعادلة التالية:
الحاصل الكلي = حاصل الوحدة التجريبية ×1000 / مساحة الوحدة التجريبية × 10000

3-14 التحليل الاحصائي
اجري التحليل الاحصائي للصفات المدروسة طبقا لطريقة تحليل التباين للتجارب العاملية وفق تصمیم القطاعات العشوائية الكاملة R.C.B.D بأستخدام أقل فرق معنوي L.S.D للمقارنة بين المتوسطات الحسابية عند مستوى احتمال 0.05 ( الراوي و خلف الله ،1980)، وباستعمال البرنامج الاحصائي Genstat .