Lakhasly

La technique Southern blot sert à cartographier les gènes (cartes de restriction) en utilisant des enzymes de restriction pour fragmenter l'ADN. Elle permet de détecter des délétions géniques, en estimant leur taille via l'analyse des fragments d'ADN, et de comparer l'ADN d'individus différents pour identifier des polymorphismes de restriction (RFLP), notamment des mutations ponctuelles affectant les sites de restriction. De plus, elle révèle les recombinaisons génétiques. Le Northern blot, utilisant une sonde ADN pour analyser l'ARN, permet d'étudier la distribution tissulaire, l'abondance, la taille et les formes d'épissage de l'ARN.

Les applications de la technique de SOUTHERN :
1-Carte de restriction de l'ADN : Les enzymes de restriction coupent l'ADN au niveau de
séquences parfaitement définies. Il est donc possible d'établir une véritable carte d'un gène
donné par la technique de Southern Cette carte porte le nom de carte de restriction.

En pratique, l'ADN à étudier est réparti en différentes fractions. Chaque fraction est traitée par
une enzyme de restriction ou un couple d'enzymes de restriction.

Ainsi dans l'illustration ci-dessous :
Dans le puits 1, on dépose l'ADN digéré par Eco RI seule; dans le puits 2, on dépose l'ADN
digéré par Hind III seule et dans le puits 3, l'ADN digéré par Eco RI et Hind III. La détection
des différents fragments est réalisée à l'aide d'une sonde marquée du gène étudié (voir
illustration). 2-Si on dispose de sondes spécifiques du gène à explorer. Mise en évidence des délétions dans
un gène ou une zone juxta-génique. L'étendue de la délétion peut être estimée par la
détermination de la taille des fragments d'ADN.
Comparaison de l'ADN de différents individus avec mise en évidence des polymorphismes de
restriction.

3-En présence de mutation(s) ponctuelle(s) dans des sites de restriction, des variations dans la
taille de certains fragments seront observées et ceci par exemple à l'intérieur d'une même
population. Ces petites différences entre des individus dans une même population sont
appelées de polymorphisme de taille des fragments de restriction (ou RFLP pour " restriction
fragment length polymorphism ").
4-Mise en évidence des recombinaisons entre des gènes.
2-Northern Blot, H : ARN/ADN : Le principe est le même que pour le Southern Blot mais
ici ce sont les ARN qui sont étudiés : donc plus besoin de digérer par enzyme de restriction (
la cible est un ARN et la sonde est un ADN).
La visualisation d'un ARN par une sonde permet de :

 apprécier sa distribution dans les tissus, étudier son abondance relative

 déterminer sa taille

 détecter les intermédiaires de maturation et les différentes formes d'épissage de l'ARN.