Lakhasly

62 géniteurs d'amble de fontaine ont été génotypés, révélant six allèles du CMHII (DAB-0101 à DAB-0601) par SSCP. Quatre allèles ont eu leur séquence codante complète isolée par RT-PCR, tandis que les séquences de l'exon 2 des deux autres ont été obtenues par PCR sur ADN génomique. 1500 descendants, issus de 25 familles, ont subi une infection par Aeromonas salmonicida (immersion 10 min, 10⁶ bactéries/ml). La survie a été surveillée sur 90 heures (mesures toutes les 4 heures) à 18°C et 50% d'oxygène.

Obtention des séquences codantes pour la chaîne ẞ du CMHII

Nous avons d'abord genotypė 62 géniteurs d'amble de fontaine de souche Rupert et identifié six allèles du CMHIII (DAB-0101 à DAB 0601) à l'aide de la technique de polymorphisme de conformation simple brin (SSCP). La technique SSCP est basée sur l'analyse électrophorétique des produits PCR sous forme de fragments simple brin. On amplifie par PCR une région que l'on désire étudier et on compare la mobilité de l'ADN dénaturé portant une mutation par rapport à celle d'un fragment de référence comportant une séquence normale. Une mutation ponctuelle au sein d'une séquence modifie suffisamment la structure secondaire de l'ADN monobrin pour qu'il en résulte des changements de migration électrophorétique sur gel de polyacrylamide

Dans leur descendance, nous avons isole la séquence codante complète de quatre des six allèles par une technique de PCR par transcriptase inverse en utilisant des amorces en 5-UTR et 3-UTR du gène. Les séquences de l'exon 2. codant pour le domaine jit des deux autres allèles, ont été obtenues par PCR sur l'ADNg avec des amorces introniques (Figure 2).

2.3 Test d'infection avec Aeromonas salmonicida.

Linfection de 1500 poissons provenant de 25 familles (60 poissons par famille) a été faite avec le pathogène Aeromonas salmonicida. Ces poissons sont issus de croisements effectués avec les géniteurs préalablement génotypés. L'infection a été réalisée par une Immersion de 10 min, dans un bain à 1 x 10806 bactéries/ml après avoir coupé une partie de la queue de chaque poisson pour favoriser l'infection. L'expérience s'est déroulée sur une période de 90 heures où le temps de survie de chaque poisson a été évalué par intervalle de 4 heures. Pendant toute la durée de l'expérience, les poissons ont été maintenus à 18 °C et 50% de saturation en oxygène

SECP, single strand conformational polymorphism